Obtención de heterohibridoma productor de anticuerpos monoclonales de tipo IgM contra el antígeno D del sistema Rh. - León-González, Graciela; Cruz, Carlos (Investigación Clínica, 2009)
El objetivo de este trabajo fue obtener un heterohibridoma capaz de producir anticuerpo monoclonal con especificidad anti-D (Sistema Rh) de tipo IgM, que pueda ser utilizado como reactivo en la hemoclasificación. Las células mononucleares (CMN) se extrajeron de una muestra de sangre de mujer altamente sensibilizada, al 5to día del post parto de RN Rh positivo. Fueron sometidas a proceso de transformación con sobrenadante de cultivo (SNC) de células B95.8 rico en viriones de Epstein Barr (VEB). Una vez transformadas y en crecimiento exponencial se fusionaron con células de la línea K6H6/B5, utilizando como agente fusógeno el PEG 4.000 en una proporción 1:1. Luego de la fusión se sembraron en placas de cultivo para posteriormente evaluar en los SNC de cada pozo, la formación de híbridos y la secreción de anticuerpos específicos. La eficiencia de fusión fue de 1,8 í— 10”“6, lográndose obtener una clona productora de anti-D IgM a la que denominamos BMS-9, la cual se pudo mantener en cultivo continuo por 3 meses produciendo anticuerpos a una concentración de 4 Âµg/mL en sobrenadante de cultivo (SNC). También se logró obtener anticuerpos en Sistema Capilar Artificial (SCA) alcanzando una concentración de 24 Âµg/mL. La potencia se determinó utilizando células Ror: En SNC a centrifugación inmediata (CI): 1 í— 32, score 52; a 15Â´de incubación a TA: 1 í— 1024 score 105; y a 37°C: 1 í— 1024 score 105. Con el producto del SCA, a CI: 1 í— 32 score 54; a 15Â´de incubación a TA: 1 í— 8192 score 136; y a 37°C: 1 í— 8192 score 136. Se detectó reactividad con eritrocitos DIIIa, DIV, DVa, DVI tipo IV, DVII, DFR, DNU, STEM+, DAR y DAU. No hubo reactividad con eritrocitos DIIIc, DIVa, DV tipo II, DVI tipo I, II y III, RoHAR, DOL y D débil tipo II. En estudio de campo, no se detectaron reacciones falsas negativas ni falsas positivas. Se obtuvo un heterohibridoma estable, productor de anti-D de tipo IgM, con cualidades suficientes para ser utilizado en la tipificación sanguínea. Dadas las excelentes cualidades del anticuerpo, estamos realizando evaluaciones con diferentes medios de dilución y con adición de anticuerpos tipo IgG, con el fin de fabricar un reactivo para uso en la hemoclasificación.