https://doi.org/10.52973/rcfcv-e33253
Recibido: 31/03/2023 Aceptado: 30/05/2023 Publicado: 22/06/2023
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Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, rcfcv-e33253, 1 - 7
RESUMEN
El estudio se realizó en vacas Holstein mestizas, criadas en el trópico
alto del Ecuador. Se determinó el efecto de la administración de
hormona Folículo-estimulante (FSH), vía epidural en dosis única,
sobre la respuesta ovárica, el número de estructuras y embriones
transferibles colectados; así como, el perl hormonal. Se probaron
dos tratamientos (T): T1 (n=14; convencional) recibieron 300 mg de
FSH repartidas en 8 dosis decrecientes vía intramuscular (IM), los días
(d) 4; 5; 6 y 7 del protocolo en la mañana y en la tarde, en T2 (n=14;
epidural) se administró 200 mg de FSH en una sola dosis vía epidural
en el d 4. En una segunda instancia se determinó la concentración
de FSH a las 0; 2; 4; 12 ,24; 26; 28; 36; 48; 50; 52; 60; 72; 74; 76 y
84 h del protocolo de superovulación (SOV). El número de folículos
antrales (FA) que respondieron a la aplicación de la FSH fue similar
(P>0,05) entre protocolos (T1=17,9 ± 1,55 folículos; T2=14,3 ± 1,69
folículos); así como también lo fue el tamaño de éstos. Sin embargo,
los animales de T2 (5,8 ± 1,83 CLs: cuerpos lúteos) presentaron 2,4
veces menos CLs que los observados en T1 (13,9 ± 1,57 CLs; P<0,05).
Se obtuvo mayor cantidad de estructuras en T1 (9,4 ± 1,05) que en T2
(4,5 ± 1,29) e igual sucedió con los embriones transferibles. La FSH
alcanzó los valores más altos a las 4 h y mantuvo concentraciones
similares durante las primeras 50 h. Luego la concentración en T2
disminuyó a valores basales inferiores a los observados en T1. Se
concluye que 200 mg de FSH aplicados por vía epidural provocaron
una superestimulación similar al protocolo convencional; sin embargo,
el número de ovulaciones y de embriones transferibles obtenidos
fueron dos veces menos que los observados en T1.
Palabras clave: Hormona folículo-estimulante; epidural; vacas
Holstein; superovulación
ABSTRACT
The study was carried out in crossbred Holstein cows, raised in
the high tropics of Ecuador. The effect of single dose epidural
follicle-stimulating hormone (FSH) administration on ovarian
response, structure number and collected transferable embryos
was determined; as well as the hormonal prole. Two treatments (T)
were tested: T1 (n=14; conventional) received 300 mg of FSH divided
into 8 decreasing doses intramuscular (IM), on days (d) 4, 5, 6 and 7 of
the protocol in the morning and in the afternoon, in T2 (n=14; epidural)
200 mg of FSH was administered in a single epidural dose on d 4.
In a second instance, FSH levels were determined at 0, 2, 4, 12, 24,
26, 28, 36, 48, 50, 52, 60, 72, 74, 76 and 84 h of the superovulation
(SOV) protocol. The number of antral follicles (AF) that responded to
the application of FSH was similar (P>0.05) in the two Treatments
(T1=17.9 ± 1.55 follicles; T2=14.3 ± 1.69 follicles); as well as their size.
However, the animals of T2 (5.8 ± 1.83 CLs: corpus luteum) presented
2.4 times fewer CLs than those observed in T1 (13.9 ± 1.57 CLs), with
a statistical difference (P<0.05). A greater number of structures was
obtained in T1 (9.4 ± 1.05) than T2 (4.5 ± 1.29), and the same occurred
with the transferable embryos. FSH reached the highest values at 4
h and remained at similar concentration throughout the rst 50 h.
Then the concentration in T2 decreased to basal values lower than
those observed in T1. In conclusion 200 mg of FSH applied via epidural
causes an superstimulation similar to the conventional protocol:
however, the number of ovulations and transferable embryos obtained
were two times less than those observed in T1.
Key words: Follicle-stimulating hormone; epidural; cows Holstein;
superovulation
Efecto de la hormona Folículo-estimulante administrada vía epidural, sobre
la respuesta ovárica y el perl hormonal en vacas Holstein
Effect of Follicle-stimulating hormone administered epidural on ovarian response and hormone
prole in Holstein cows
María Gabriela Farías-Delgado
1,3
, Juan José Zambrano
1
, Andrés Santiago Jácome-Aucay
2
, Jorge Bolívar Dután-Sanango
2
,
Gabriela Sofía Garay-Peña
2
, Luis Eduardo Ayala-Guanga
2
*
1
Universidad Técnica de Manabí, Facultad de Ciencias Veterinarias. Manabí, Ecuador.
2
Universidad de Cuenca, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Carrera de Medicina Veterinaria. Cuenca, Ecuador.
3
Universidad Laica Eloy Alfaro de Manabí, Carrera Agropecuaria, Extensión Chone. Chone, Ecuador.
*Autor para correspondencia: luis.ayala@ucuenca.edu.ec
Hormona folículo-estimulante administrada vía epidural / Farías-Delgado y col. ____________________________________________________
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INTRODUCCIÓN
La superovulación (SOV) y la transferencia de embriones (TE) son
herramientas que se utilizan para multiplicar animales de alto valor
genético [1]. En los protocolos de SOV comúnmente se utiliza la
hormona folículo-estimulante (FSH), gonadotropina que impulsa el
crecimiento y desarrollo de varios folículos secundarios hasta el estadio
de dominancia [2], característica que permite obtener mayor número
de ovocitos listos para ser fecundados y por ende, embriones a ser
colectados [3]. Sin embargo, la vida media de 2 h de la FSH genera la
necesidad de administrar esta hormona dos veces al día (d) (cada 12 h),
por 4 d consecutivos como mínimo [4]. Por lo tanto, es necesario llevar
a la donadora 8 veces a la manga de sujeción (Lux, Campo, Ecuador), lo
cual provoca estrés y esto a su vez reduce la respuesta superovulatoria;
además, la administración consecutiva de la hormona puede llevar a
errores en la dosicación del producto [5].
Varios estudios han buscado reducir el número de aplicaciones de
FSH mediante la administración intramuscular (IM) o subcutánea (SC)
de esta gonadotropina disuelta en agentes de liberación lenta, como la
polivinilpirrolidona [6] e hidróxido de aluminio en gel (AH-gel) en bovinos
(Bos taurus) [5]. Pero estos diluyentes mezclados con la FSH producen
una solución viscosa difícil de preparar y homogenizar; además, estos
agentes de liberación lenta incrementan el costo nal del protocolo.
En el año 2018 se describió que la aplicación de una dosis de FSH
por vía epidural (400 mg) provocó estimulación ovárica en bovinos,
generando resultados alentadores en cuanto a número de embriones
colectados, que fueron similares a los obtenidos al aplicar múltiples
dosis de FSH por vía IM [7]. La liberación lenta de la FSH en la
circulación periférica se consiguió gracias a la cantidad de grasa que
contiene el conducto epidural del ganado bovino con una condición
corporal (CC) alta (> 3 CC).
Sin embargo, en un trabajo reciente en ganado bovino, con una
CC entre 3-3,5, la administración de 400 mg de FSH vía epidural en
una sola dosis, produjo menos folículos mayores a 9 mm comparado
con los animales que recibieron FSH por vía IM (8 dosis), esto inuyó
directamente en el número de ovulaciones, estructuras y embriones
transferibles colectados en las donadoras que recibieron la FSH vía
epidural [8], probablemente como consecuencia de que esta vía de
administración (epidural) no permitió mantener niveles altos de la
hormona al menos por 72 h, tiempo mínimo requerido para que los
folículos puedan proliferar, crecer y adquirir capacidad ovulatoria
[9]. Estos resultados contradictorios crean la necesidad de valorar la
concentración de FSH post-administración vía epidural de la hormona
en donadoras de tendencia lechera.
El estudio determinó el efecto de la administración de 200 mg de
hormona FSH vía epidural en dosis única, sobre la respuesta ovárica y
el perl hormonal en vacas Holstein mestizas, criadas en el trópico alto.
MATERIALES Y MÉTODOS
Animales y granja
Veintiocho vacas multíparas de genotipo Holstein mestizo de
dos granjas comerciales, ubicadas sobre los 2.500 metros sobre el
nivel del mar, en el trópico alto del Ecuador, fueron seleccionadas
y divididas al azar en dos tratamientos (T): T1=Convencional (n=14)
y T2=Epidural (n=14). Las vacas presentaron pesos promedios
similares de 565,9 ± 19,68 y 591,2 ± 15,43 kg, respectivamente, CC
de 2,8 ± 0,05 (T1) y 2,7 ± 0,06 (T2) en escala de 1-5, de acuerdo a lo
determinado por Hoedemaker y col. [10], con un recuento de folículos
antrales (RFA) de 19,3 ± 0,75 en T1 y 17,9 ± 1,55 en T2. Tenían una edad
promedio de 6,4 ± 0,49 (T1) y 6,5 ± 0,41 años (T2), con 3,6 ± 0,32 partos
(T1) y 3,5 ± 0,29partos (T2) y una producción promedio de 22,9 ± 1,45 y
22,35 ± 1,43 kg de leche, respectivamente. Al momento de la selección
de donantes, éstas fueron evaluadas mediante palpación transrectal
de órganos reproductivos para corroborar su estado cíclico, la
morfología cervical adecuada para permitir el paso del embrión a
través del catéter de recolección (determinado al pasar un catéter de
transferencia en cada donante, a través de su cérvix), y la ausencia
de patologías en el tracto reproductivo [11].
En el segundo experimento se utilizaron 8 de las 21 vacas Holstein
mestizas utilizadas en el primer ensayo, estas pertenecían a la granja
experimental de la Universidad de Cuenca, Ecuador. Los animales
fueron divididos aleatoriamente en dos grupos: tratamiento
convencional (T1) y tratamiento epidural (T2). Con una edad media de
6,6 ± 0,81 años (T1) y 6,5 ± 0,64 años (T2), CC promedio de 2,9 ± 0,08 (T1) y
2,8 ± 0,06. El peso corporal fue de 647,5 ± 43,84 kg (T1) y 641,5 ± 55,93 kg
(T2), y la producción láctea promedio 19,3 ± 0,66 kg (T1) y 19,2 ± 0,64 kg
(T2). Durante la realización del estudio se tuvo presente la normativa
del código sanitario para animales terrestres, capítulo 7,8 “Utilización
de animales en la investigación y educación”, de la Organización
Mundial de Sanidad Animal [12].
Diseño experimental
La investigación fue de tipo experimental, y en un primer ensayo
se valoró el efecto de la administración de FSH por vía intramuscular
(300 mg) repartidos en 8 dosis (T1) y la vía epidural (200 mg) en una
sola dosis (T2), sobre la respuesta al protocolo de SOV. En el segundo
ensayo se comparó la concentración plasmática media de FHS
en los d 4; 5; 6 y 7 del protocolo, luego de administrar FSH por vía
intramuscular (T1) y vía epidural (T2).
Estadística
Los datos fueron procesados en Excel y analizados en el programa
estadístico SPSS versión 25. Se comprobó la normalidad de los datos
mediante la prueba de Shapiro Wilk. La comparación de la concentración
de FSH, el análisis del RFA (d 4) y la respuesta a la superovulación (d
9), ovulación (CL=d 16) y el número de embriones obtenidos (d 16) del
protocolo fue realizada mediante la prueba de t de Student.
Protocolo convencional (T1)
Los 14 animales de T1 recibieron 300 mg de FSH repartidas en 8 dosis
decrecientes en los d 4; 5; 6 y 7 del protocolo de SOV. El d0 (06h00) se
colocó un dispositivo intravaginal de liberación de progesterona (CIDR®;
1,9 g de progesterona; Zoetis, Quito, Ecuador) + 2 mg de benzoato de
estradiol (BE; Gonadiol®; Zoetis, Quito, Ecuador), por vía IM y 50 mg
de progesterona inyectable (Progesterona®; ERMA, Quito, Ecuador). A
partir del d 4 en la mañana (06h00) y en la tarde (18h00), las donadoras
recibieron dosis decrecientes de FSH (Folltropin-V®, Vetoquinol, Québec,
Canada) por cuatro d (60; 60; 40; 40; 30; 30; 20; 20 mg), tal como se indica
en FIG. 1. El d 6 en la mañana y la tarde se aplicaron 25 mg de dinoprost
trometamina (Lutalyse®, Zoetis, Lima, Perú), y el d 7 por la mañana se
retiró el implante. El d8 se detectó el celo por observación directa con
ayuda de un parche indicador de estro (EstrotectTM, EUA), en la tarde se
administró una dosis de 0,25 mg de gonadorelina (GnRH®, MSD, Nueva
York, EUA). En la mañana del d 9 se realizó la primera inseminación
articial (IA) y 12 h después se efectuó la segunda IA.
FIGURA 1. Protocolo de superovulación convencional (T1). BE: Benzoato de
estradiol. P4: Progesterona inyectable. DIP: Dispositivo intravaginal de liberación
de progesterona. FSH: Hormona folículo-estimulante. PG: Prostaglandina.
Parche: Parche detector de celo. GnRH: Hormona liberadora de gonadotropina.
IA: inseminación articial. Colecta: colecta de embriones
FIGURA 2. Protocolo de superovulación epidural (T2). BE:Benzoato de
estradiol. P4:Progesterona inyectable. DIP:Dispositivo intravaginal de
liberación de progesterona. FSH:Hormona folículo-estimulante (200 mg).
PG:Prostaglandina. Parche:Parche detector de celo. GnRH:Gonadotropina.
IA: inseminación articial. Colecta:colecta de embriones
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Protocolo epidural (T2)
Las donadoras del protocolo epidural recibieron el d 0 a las 06h00
un dispositivo intravaginal de liberación de progesterona (CIDR®;
1,38 g de progesterona; Zoetis, Quito, Ecuador) + 2 mg de benzoato
de estradiol (BE; Gonadiol®; Zoetis, Quito, Ecuador), por vía IM, y
50 mg de progesterona inyectable (Progesterona®; ERMA, Quito,
Ecuador). En la mañana (06h00) del d 4 los animales recibieron 200
mg de FSH (Folltropin-V®, Vetoquinol, Québec, Canada) diluidos en
5 mL de solución salina estéril por vía epidural (dosis única), entre
la última vértebra sacra y la primera coccígea. El d 6 en la mañana
(06h00) y en la tarde (18h00) se aplicó una dosis de 25 mg de dinoprost
trometamina (Lutalyse®, Zoetis, Lima, Perú). El d 7 en la mañana se
retiró el implante de progesterona. Al d siguiente (d 8), a las 06h00 se
colocó un parche detector de celo (EstrotectTM, EUA) y en la tarde se
aplicaron 0,25 mg de gonadorelina (GnRH®, MSD, Nueva York, EUA). El
d 9 en la mañana se realizó la primera IA y en la tarde la segunda IA, la
colecta de los embriones se ejecutó en el d 16 del protocolo (FIG. 2).
indicada para el RFA. La respuesta ovulatoria se estableció mediante
el recuento de cuerpos lúteos (CLs) presentes en los dos ovarios en
el d 16 del protocolo, luego del proceso de colecta de los embriones.
Colecta de embriones
Siete d después de la primera IA (d 16), las donadoras fueron colocadas
en una manga, teniendo presente las normas de bioseguridad, tanto
para el operador como para el animal. Se realizó asepsia del área vulvar y
perineal. Para la insensibilización y tranquilización, se utilizó una mezcla
de 4 mL de clorhidrato de lidocaína al 2 %, (LidocaineTM, Richmond Vet
Pharma, Buenos Aires, Argentina) y 0,4 mL de xilacina al 2 % (Xilacina20,
Richmond Vet Pharma, Buenos Aires, Argentina), aplicada por vía
epidural. Los embriones fueron colectados mediante técnica no
quirúrgica, con un sistema de circuito abierto con ujo continuo [2].
Se utilizó el medio de lavado comercial (ViGRO™, Vetoquinol, Québec,
Canada) y los embriones se colectaron en un ltro EmCon de 75 µm,
(Arbiotech, Culiacán, México). El grado de desarrollo y calidad de los
embriones fue determinado en base a los parámetros establecidos
por la Sociedad Internacional de Tecnología Embrionaria (IETS) [14].
Valoración de la concentración de FSH plasmática
Al inicio del protocolo se colocó un catéter intravenoso para
animales grandes en la vena yugular de las vacas de T1 y T2, que facilitó
la toma de las muestras de sangre (5 mL) en tubos Vacutainer con
ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA, Vacutainer®). El muestreo
se inició a las 06h00 del d 4 considerándose ésta como la hora 0,
luego se tomaron muestras a las 2; 4; 12; 24; 26; 28; 36; 48; 50; 52;
60; 72; 74; 76 y 84 h (TABLA I). Las muestras fueron colocadas en un
cooler (Chiller, 16 QT, Coleman®, EUA) con hielo (5°C) y se trasportaron
al laboratorio para ser centrifugadas (Hettich, Micro 200, Alemania)
a 3.000 gravedades (G) × 10 min. El sobrenadante fue colectado y
congelado a -20°C hasta su análisis (Congelador SMC, CG11HB, China).
Recuento de folículos antrales (d 4), valoración de la respuesta al
proceso de SOV (d 9) y evaluación del número de cuerpos lúteos (d 16)
El RFA >4 mm fue realizado mediante valoración endorrectal
con un ecógrafo (Aloka ProSound 2®, Tokyo-Japón) provisto de un
transductor lineal de 7,5 MHz, el d 4 del protocolo de superovulación
(SOV). La exploración de los ovarios se realizó según lo describió Ayala
y col. [13] que brevemente consistió en un barrido latero-medial,
dorso-ventral y cráneo-caudal, primero del ovario derecho y luego
el izquierdo. Las valoraciones ecográcas fueron realizadas siempre
por el mismo técnico.
Para determinar la respuesta superovulatoria se contó el número de
FA mayores a 8 mm en cada uno de los ovarios (d 9), mediante la técnica
TABLA I
Protocolo de toma de muestras de sangre
D 4 D 5 D 6 D 7
Hora Muestra Hora Muestra Hora Muestra Hora Muestra
06:00 0h 06:00 24h 06:00 48h 06:00 72h
08:00 2h 08:00 26h 08:00 50h 08:00 74h
10:00 4h 10:00 28h 10:00 52h 10:00 76h
18:00 12h 18:00 36h 18:00 60h 18:00 84h
La determinación de la concentración de FSH se realizó por
inmunoensayo enzimático competitivo (Bovine follicle-stimulating
hormone (FSH) ELISA Kit). La dosis mínima detectable de FSH bovina
según el fabricante fue inferior a 2 miliunidades internacionales·mL
-1
(mUI·mL
-1
). Precisión intra-ensayo: CV%<15 %, precisión entre
ensayos: CV%<15 %.
Debido a que la mayoría de los trabajos publicados sobre la
concentración de FSH en la especie bovina se describe en ng·mL
-1
,
las concentraciones obtenidas en mUI·mL
-1
en el presente estudio
fueron transformadas a ng·mL
-1
, considerando que 1 mUI·mL
-1
equivale
a 0,047 ng·mL
-1
.
FIGURA 3. Media y error estándar del recuento de folículos antrales (RFA) en el d 4 del protocolo de superovulación (Panel
A). Folículos que respondieron al protocolo de SOV en el d 9 (Panel B). Tamaño promedio de los folículos que respondieron
a la SOV (Panel C). Prueba de t de Student 5 %
Hormona folículo-estimulante administrada vía epidural / Farías-Delgado y col. ____________________________________________________
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Recuento de folículos antrales el d del reinicio de la onda folicular (d 4)
El número de FA menores a 4 mm valorado el d del inicio de la onda
folicular (d 4) fue similar (P>0,05) en T1 (19,3 ± 0,75) y T2 (19,9 ± 0,62;
FIG. 3A), lo cual permitió iniciar el estudio en condiciones similares
en cuanto al RFA en los dos T. Los resultados del RFA observados
fueron similares al reportado previamente en vacas Holstein mestizas
alimentadas al pastoreo en el trópico alto ecuatoriano (17,26 ± 0,38
folículos [15], o el descrito para esta raza (18,5 ± 9,0 folículos) en zonas
altas de países de cuatro estaciones [16].
Respuesta al protocolo de superovulación (d 9)
Al valorar mediante ecografía el número de folículos que respondieron
a la aplicación de la FSH en el d 9 del protocolo, se determinó que el
92,75 % de FA en T1 (17,9 ± 1,55 folículos) y el 71,86 % en T2 (14,3 ± 1,69
folículos; FIG. 3B), respondieron a la aplicación de la gonadotropina,
sin diferencia estadística (P>0,05) entre grupos; además, el tamaño
de los folículos fue mayor a 8 mm en los dos T (T1=10,92 ± 0,41
mm; T2=10,15 ± 0,50 mm), característica necesaria para que el
folículo obtenga capacidad para ovular (11,6 ± 0,5 mm) en vacas de
raza Holstein [17].
El número de folículos observado el d 9 del protocolo fue similar a
los reportados por Sakaguchi y col. [7], quienes describieron 18,3 ± 7,5
folículos que respondieron a la SOV al aplicar 8 dosis de FSH vía IM
y 15,4 ± 6,0 folículos al administrar una dosis de FHS vía epidural, sin
presentar diferencia estadística entre (P>0,05) grupos, estos animales
eran de predominio cárnico con una condición corporal mayor a 3
puntos en escala de 1 a 5. La evidencia cientíca señala que una
buena CC produce mayor depósito de grasa en el canal vertebral,
lo cual contribuye a un movimiento más lento y sostenido de la FSH
hacia la circulación periférica [18]. Sin embargo, en ganado lechero se
observó que la aplicación de FSH IM produce mayor respuesta a la SOV
(17,1 ± 1,5 folículos) comparado con animales que recibieron FSH vía
epidural (8,5 ± 1,5 folículos) [8]; esto podría estar ligado a una menor CC
(2,75 a 3) que este tipo de ganado presentan en la fase de producción
láctea, factor que reduce la respuesta superovulatoria [19]. En estos
casos, los folículos preovulatorios normalmente alcanzaron tamaños
menores a 10 mm, lo cual no es suciente para que el folículo adquiera
capacidad ovulatoria en los bovinos de leche [20]. Estos resultados
dieren de los obtenidos en el presente estudio. Por lo tanto, se
considera que la aplicación de 200 mg de FSH por vía epidural (T2)
en este estudio, fue suciente para estimular el crecimiento de los
folículos a tamaños similares al tratamiento 1 (10,15 ± 0,50 y 10,92 ± 0,41
mm, respectivamente), sin diferencias estadísticas (P>0,05) entre
tratamientos (FIG. 3C).
Recuento de cuerpos lúteos y folículos que no ovularon
Los animales que recibieron FSH vía epidural presentaron 2,1 veces
más folículos (8,07 ± 1,13) que no llegaron a ovular (FNO) comparado con
las vacas del tratamiento convencional (3,71 ± 0,9; P<0,05; FIG. 4C). Esto
generó que los animales de T2 (5,8 ± 1,83 CLs) presentaran 2,4 veces
menos CLs que los observados en T1 (13,9 ± 1,57 CLs) con diferencia
estadística entre grupos (FIG. 4A) Sin embargo, el tamaño de los CLs
en los dos T (T1=15,4 ± 0,85 mm y T2=16,7 ± 1,21 mm) fue similar (P>0,05;
FIG. 4B). Se especula que la disminución de ovulaciones y por ende el
número de CLs en los animales que recibieron una dosis de hormona
vía epidural, estuvo relacionado con el incremento rápido de FSH por
un periodo corto de tiempo al inicio del protocolo (2-4 h), seguido de
una disminución brusca a las 52 h, lo cual impidió que los folículos
contaran con niveles adecuados de FSH en la etapa nal de maduración
y adquisición de capacidad ovulatoria [21]. Estos resultados guardan
concordancia con los descritos por Chumchai y col. [8], quienes
aplicaron 400 mg de FSH vía epidural y 400 mg vía IM y observaron
que el tratamiento convencional presentó más CLs 15,3 ± 1,0 que los
animales que recibieron FSH vía epidural (8,5 ± 1,3 CLs).
FIGURA 4. Media y error estándar del número de CLs (Panel A). Tamaño de CLs (Panel B). Número de folículos que no
llegaron a ovular (Panel C). Valorado el d 16 del protocolo. Prueba de t de Student 5 %
FIGURA 5. Media y error estándar del número de ovocitos no fecundados (UFOs; Panel A). Número de embriones transferibles
(Panel B). Número de estructuras colectadas (Panel C). Valorado el d 16 del protocolo. Prueba de t de Student 5 %
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Número de embriones colectados
En T1 se recuperaron 9,4 ± 1,05 estructuras, y de éstas, el 70,2 %
fueron embriones transferibles y 27,8 % ovocitos no fecundados
(UFO’s), difiriendo estadísticamente (P<0,05) de T2, donde se
colectaron 4,5 ±1,29 estructuras, de las cuales el 57,8 % fueron
embriones transferibles y el 42,2 % UFO’s (FIG. 5). El número de
estructuras colectadas en el presente estudio en T1 y T2 fueron similar
a los obtenidos en donadoras Holstein [8], donde se aplicaron 400 mg
de FHS vía convencional (8,6 ± 1,4 estructuras) y 400 mg vía ××epidural
(4,9 ± 2,0 estructuras); sin embargo, los autores describieron que no
existió diferencia estadística entre sus dos T, lo cual diere de los
resultados obtenidos por nosotros en T1 y T2. Esta controversia podría
estar relacionada con el número de animales utilizados en el presente
estudio y su CC al momento de la SOV (14 × T; 2,9, respectivamente)
con respecto al trabajo realizado por Chumchai y col. [8] que fueron 8
animales por T y su CC fue de 3,5 al momento de la SOV. Sin embargo,
Chumchai y col. [8] describieron que el porcentaje de embriones
transferibles colectados en los animales que recibieron FSH en
forma convencional (66,3 %) fue superior al porcentaje de embriones
recuperado en los animales que recibieron FSH vía epidural (22,4 %),
con diferencia estadística entre T, lo cual coincide con los resultados
obtenidos (FIG. 5B).
En un trabajo realizado en ganado de predominio cárnico se
describió que, la administración de FSH por vía IM (tratamiento
convencional) y por vía epidural permitió obtener un número de
estructuras (18,3± 5,4; 10,9± 7,6, respectivamente) y blastocistos
transferibles (9,0± 6,0 vs 4,7± 3,5) similares estadísticamente [7], lo
cual diere de los presentes resultados (FIG. 5B y 5C). Probablemente,
estaría relacionada con la raza y tendencia productiva de los animales
utilizados en los dos experimentos.
FIGURA 6. Concentración de FSH valorada a partir de las 06h00 del d 4 del protocolo de SOV, en la
siguiente secuencia: h= 0; 2; 4; 12; 24; 26; 28; 36; 48; 50; 52; 60; 72; 74; 76; 84; T1 (convencional): línea
negra continua. T2(epidural): línea entrecortada. *: Diferencia estadística al 5 %
Hormona folículo-estimulante administrada vía epidural / Farías-Delgado y col. ____________________________________________________
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Concentración de la hormona Folículo-estimulante
La muestra tomada a las 0 h del d 4 (06h00 am), antes de aplicar la
primera dosis de FSH, mostró una concentración similar (P>0,05) en
los dos T: T1 (1,41 ± 0,21 ng·mL
-1
) y T2 (1,26 ± 0,09 ng·mL
-1
). Estos valores
son considerados basales (<1,5 ng·mL
-1
) en la especie bovina [22].
En la segunda valoración del d 4 (hora 2), la concentración de la
FSH se elevó a 20,74 ± 9,74 ng·mL
-1
(T1) y en T2 a 25,46 ± 6,15 ng·mL
-1
,
sin diferencia entre tratamientos (P>0,05). Este incremento es
concordante con lo descrito en otro trabajo dos h post aplicación
de FSH vía IM en vacas Holstein (>25 ng·mL
-1
); sin embargo, los
animales que recibieron FHS vía epidural, si bien incrementaron
la concentración de esta hormona (>10 ng·mL
-1
), el aumento fue
menor [8]. Está descrito que un protocolo ideal de superovulación
requiere aumentar la FSH circulante a concentraciones superiores a
las observadas antes de la aparición de una onda folicular (2,5 ng·mL
-1
)
y mantenerse por al menos por 72 h para que el crecimiento de los
folículos sea continuo y puedan alcanzar el tamaño mínimo de 8 mm
para adquirir capacidad para ovular [23], este principio se cumplió
en los dos T a partir de las 2h post-administración de la FSH.
El valor máximo de la FSH en T1 (convencional) fue observado a las
4 h post aplicación de la hormona (28,65 ± 7,55 ng·mL
-1
), sin diferencia
estadística con T2 (23,05 ± 9,26 ng·mL
-1
). A partir de este momento,
la caída de la concentración de la FSH en ambos T fue sostenida y
continua hasta la cuarta toma (12 h: 13,68 ± 8,13 ng·mL
-1
y 18,47 ± 4,17
ng·mL
-1
, respectivamente), llegando al valor mínimo a las 24 h en T1
(10,81 ± 8,22 ng·mL
-1
). Sin embargo, en T2 (20,80 ± 10,06 ng·mL
-1
), la
concentración de la FSH a las 24h fue el doble de la observada en T1,
indicando que la vía epidural permite mantener una liberación lenta y
constante de la FSH comparada con la administración IM [24]. Esto
probablemente se deba al contenido de grasa que poseen el espacio
vertebral; así como a la cantidad y disponibilidad de venas epidurales
y a la solubilidad de la sustancia aplicada [18].
En el d 5 luego de la administración de la FSH en los animales
de T1, la concentración de esta hormona mostró valores similares
a los observados en el cuarto d, es decir, se elevó hasta 4 h post-
administración de la FSH, para luego disminuir paulatinamente. En
los animales de T2 la concentración de FSH en el d 5 mostró valores
más estables que los observados en T1 sin diferencia (P>0,05) entre T.
Sin embargo, en el sexto d del muestreo a las 52 h, se determinó
2,3 veces menos hormona en T2 (8,87 ± 1,77 ng·mL
-1
) que en T1
(20,84 ± 3,23 ng·mL
-1
), con diferencia estadística entre T (P<0,05).
Estos resultados demuestran que la vía epidural permitió mantener
por 50 h concentraciones de FSH similares a las observadas en los
animales de T1 y que a partir de las 52h la concentración de FSH en
los animales de T2 bajó rápidamente a niveles basales, mientras que
en T1 se mantuvieron elevados. Probablemente, la baja concentración
de FSH a las 52h del protocolo de SOV contribuyó para que un gran
número de folículos de las donadoras de T2 obtuvieran capacidad
para ovular [23], factor que redujo el número de FA que llegaron a
ovular, provocando que se obtuvieran menor número de estructuras
y embriones transferibles el d de la colecta.+
______________________________________________________________________Revista Cientifica, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, rcfcv-e33253, 1 - 7
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CONCLUSIONES
La administración de 200 mg de hormona folículo-estimulante en
una sola dosis por vía epidural produce respuesta superovulatoria
satisfactoria en vacas Holstein mestizas, criadas en el trópico alto,
gracias a la alta concentración de FHS presente en las primeras 50
h del protocolo. Sin embargo, la caída abrupta de la hormona a partir
de las 52 h genera un bajo porcentaje de ovulación y por consiguiente
un menor número de embriones transferibles colectados.
RECOMENDACIONES
En base a los resultados obtenidos se recomienda valorar dosis más altas
de FSH aplicadas por vía epidural, en busca de mejorar el porcentaje de
ovulación y embriones colectados en un protocolo de SOV. Otra alternativa
sería probar la administración de una dosis de refuerzo vía intramuscular
a las 52 h para mantener niveles altos en la fase nal del protocolo de SOV.
Finalmente, se podría valorar diferentes dosis de FSH vía epidural, para
estimular el ovario previo a la aspiración ecoguiada (OPU).
Conicto de interés
Los autores conrman que no existen conictos en el presente trabajo.
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