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______________________________________________________ Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, Supl. Esp., 240 - 278, 2023
Efecto de la suplementación con epinefrina en los
medios de maduración sobre la competencia de
desarrollo de los ovocitos de búfala
Ali Husnain1*, Abdul Khaliq1, Talha Ashraf1,
Abdul Rehman1, Muhammad Yasir Zahoor2,
Muhammad Binyameen3, Amjad Riaz1
1 Departamento de Teriogenología,
2 Instituto de Bioquímica y Biotecnología, Universidad de
Ciencias Veterinarias y Animales, Lahore, Pakistán,
3 División de Reproducción, Instituto de Investigación Buffalo,
Pattoki, Pakistán
*Autor de correspondencia: Ali Husnain (ali.husnain@uvas.edu.pk)
RESUMEN
La epinefrina es una catecolamina que desempeña un
papel vital durante el estrés celular al eliminar los radicales li-
Eect of supplementing epinephrine in matura-
tion media on the developmental competence of
bualo oocytes
Ali Husnain1*, Abdul Khaliq1, Talha Ashraf1,
Abdul Rehman1, Muhammad Yasir Zahoor2,
Muhammad Binyameen3, Amjad Riaz1
1 Department of Theriogenology
2 Institute of Biochemistry and Biotechnology, University of
Veterinary and Animal Sciences, Lahore, Pakistan,
3Reproduction Division, Buffalo Research Institute, Pattoki,
Pakistan
*Corresponding author: ali.husnain@uvas.edu.pk
ABSTRACT
Epinephrine is a catecholamine that plays a vital role
during cellular stress by scavenging free radicals. During in
R-236 Rev. Cientif. FCV-LUZ, XXXIII, SE, 273-274, 2023, https://doi.org/10.52973/rcfcv-wbc119
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13th World Bualo Congress ~ 13er Congreso Mundial de Búfalos / Posters / Reproduction _______________________________________
vitro maturation, oocytes experience stressful conditions that
likely compromise their development. The objective of the ex-
periment was to investigate the eect of the addition of epi-
nephrine in IVM media on nuclear maturation and in vitro
developmental competence of oocytes. Bualo oocytes were
harvested from slaughterhouse ovaries. Oocytes of A and B
grade were matured for 24 hours in IVM media supplemented
with increasing concentrations of epinephrine 0, 0.01, 1.0, and
100 µM. The maturation of oocytes was examined based on the
nuclear maturation after staining with Hoechst 33342 (Sigma
Aldrich, St. Louis, MO, USA). After maturing with epinephrine,
oocytes were fertilized for 6 hours with post-thawed semen
from a single bull. Presumptive zygotes were cultured in com-
mercial media (IVF Bioscience, Falmouth, UK), and cleavage
was observed 48 hours after fertilization. The blastocyst rate
was assessed on day 7 of the culture. Maturation and fertiliza-
tion media were prepared in-house. Blastomere was counted
from the hatched blastocyst after staining with Hoechst 33342
using an inverted microscope equipped with Cellsens software.
The data was analyzed using the GLIMMIX procedures of SAS.
The statistical model included the xed eect of treatment and
random replication. Orthogonal polynomial contrasts were built
to assess the dose-response of epinephrine. Results repre-
sented as least square means and respective standard error
of means (LSM ± SEM). Adding epinephrine to the maturation
media did not aect the nuclear maturation and cleavage. Me-
dia supplemented with epinephrine at 0, 0.01, 1.0, and 100 µM
concentrations had a proportion of meiotic I and II oocytes of
83.1 ± 6.0, 85.5 ± 6.3, 75.3 ± 5.9, and 70.9 ± 6.4%) and cleav-
age rate of 58.2 ± 4.6, 60.5 ± 4.6, 54.7 ± 4.5, and 47.8 ± 4.4%)
respectively. However, the proportion of blastocyst out of ma-
tured oocytes was increased (p=0.01; 35.9 ± 4.5, 43.2 ± 4.8,
36.0 ± 4.3, and 25.8 ± 3.8%) with epinephrine supplementation
and the response was maximized (Quadratic eect; p=0.01) at
0.01 μM concentration. Consistently, the proportion of blasto-
cyst out of cleaved embryos tended to increase (p=0.13; 62.1 ±
5.0, 72.4 ± 4.6, 66.7 ± 4.7, and 55.3 ± 5.3%) with epinephrine
and the response was maximized (Quadratic eect; p=0.04) at
0.01 μM concentration. Supplementation of epinephrine in mat-
uration media increased (p<0.01) the blastomere number, and
response was maximized (Quadratic eect; p<0.01) at 1.0 μM
concentration. It is concluded that supplementing epinephrine
in maturation media had a favorable eect on the blastocyst
formation, and signicant benets were observed at 0.01 µM
concentration.
Keywords: epinephrine, oocyte, maturation, cleavage rate,
blastocyst.
bres. Durante la maduración in vitro, los ovocitos experimentan
condiciones estresantes que probablemente comprometan su
desarrollo. El objetivo del experimento fue investigar el efecto
de la adición de epinefrina en medios de maduración in vitro
(IVM) sobre la maduración nuclear y la competencia de de-
sarrollo in vitro de los ovocitos. Los ovocitos de búfalas se
recolectaron de ovarios de matadero. Se maduraron ovocitos
de grado A y B durante 24 horas en medio IVM suplementa-
do con concentraciones crecientes de epinefrina 0, 0,01, 1,0 y
100 µM. La maduración de los ovocitos se examinó en función
de la maduración nuclear después de la tinción con Hoechst
33342 (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.). Después de
madurar con epinefrina, los ovocitos fueron fertilizados durante
6 horas con semen postdescongelado de un solo toro. Se culti-
varon presuntos cigotos en medios comerciales (IVF Bioscien-
ce, Falmouth, Reino Unido) y se observó la escisión 48 horas
después de la fertilización. La tasa de blastocistos se evaluó
el día 7 del cultivo. Los medios de maduración y fertilización
se prepararon internamente. Se contó el número de blastóme-
ras a partir del blastocisto eclosionado después de teñir con
Hoechst 33342 utilizando un microscopio invertido equipado
con el software Cellsens. Los datos se analizaron utilizando
los procedimientos GLIMMIX de SAS. El modelo estadístico in-
cluyó el efecto jo del tratamiento y la replicación aleatoria. Se
construyeron contrastes polinomiales ortogonales para evaluar
la dosis-respuesta de epinefrina. Los resultados se represen-
tan como medias de mínimos cuadrados y el respectivo error
estándar de medias (LSM ± SEM). La adición de epinefrina a
los medios de maduración no afectó la maduración y escisión
nuclear. Los medios suplementados con epinefrina a concen-
traciones de 0, 0,01, 1,0 y 100 µM tuvieron una proporción
de ovocitos meióticos I y II de 83,1±6,0, 85,5±6,3, 75,3±5,9
y 70,9±6,4%) y una tasa de escisión de 58,2±4,6. , 60,5±4,6,
54,7±4,5 y 47,8±4,4%), respectivamente. Sin embargo, la pro-
porción de blastocistos a partir de los ovocitos maduros au-
mentó (p=0,01; 35,9±4,5, 43,2±4,8, 36,0±4,3 y 25,8±3,8%) con
la suplementación con epinefrina y la respuesta se maximi-
zó (efecto cuadrático; p=0,01 ) a una concentración de 0,01
μM. Consistentemente, la proporción de blastocistos de los
embriones escindidos tendió a aumentar (p=0,13; 62,1±5,0,
72,4±4,6, 66,7±4,7 y 55,3±5,3%) con epinefrina y la respuesta
se maximizó (efecto cuadrático; p=0,04) a una concentración
de 0,01 μM. La suplementación con epinefrina en los medios
de maduración aumentó (p<0,01) el número de blastómeros
y la respuesta se maximizó (efecto cuadrático; p<0,01) a una
concentración de 1,0 μM. Se concluye que la suplementación
con epinefrina en los medios de maduración tuvo un efecto
favorable sobre la formación de blastocistos y se observaron
benecios signicativos a una concentración de 0,01 µM.
Palabras clave: epinefrina, ovocito, maduración, tasa de esci-
sión, blastocisto.
