Efecto de la temperatura de conservación del medio de maduración in vitro sobre la capacidad de desarrollo de ovocitos bovinos. / Effect of in vitro maturation medium on development capacity of bovine oocytes.

  • Liz Greyli Rosell Viloria Universidad del Zulia
  • Zeylin del Carmen Millano Bracho Universidad del Zulia
  • Francisco Báez Contreras Universidad del Zulia
  • Patricia Villamediana Monreal Universidad del Zulia
  • Rumualdo González Fernández Venezolana de Inseminación artificial y Trasplante de Embriones, C.A.
Palabras clave: MIV, ovocitos, blastocistos, bovinos, temperatura criogénica, IVM, oocytes, blastocyst, bovine, cryogenic temperature.

Resumen

Resumen

Un factor principal que determina las tasas de blastocistos obtenidos con la técnica de producción in vitro (PIV) de embriones, es la calidad de los ovocitos. Por tal razón, es necesario proporcionar condiciones adecuadas del sistema de cultivo para que los ovocitos se desarrollen en embriones viables. El propósito de este trabajo fue evaluar el efecto de la temperatura de conservación de un medio comercial de maduración in vitro (MIV; TCM-199) sobre la capacidad de desarrollo de ovocitos bovinos mestizos. Los ovocitos fueron recuperados a partir de ovarios de vacas sacrificadas, mediante la técnica de aspiración folicular. Los complejos cumulusovocito (COCs) seleccionados fueron puestos a madurar en medio de MIV fresco y congelado/descongelado en nitrógeno líquido (N2 L). Los ovocitos madurados se fecundaron in vitro (FIV) y luego los presuntos cigotos se cultivaron durante 8 días en medio de fluido oviductal sintético modificado y suplementado con aminoácidos esenciales y no esenciales (mSOFaa) +8 mg/mL de albúmina sérica bovina (BSA). No se observó diferencia estadística entre las tasas de MIV-FIV y la división embrionaria entre ambos tratamientos; contrariamente, se encontraron diferencias significativas (P<0,05) en la producción de blastocistos provenientes de ovocitos madurados en medio fresco vs congelado al día 8 (29,08% vs 13,01% respectivamente). En conclusión, con el medio de MIV congelado se obtiene una adecuada maduración nuclear e igualmente proporciona una tasa de fecundación y de división embrionaria en ovocitos bovinos, similar a la aportada por el medio fresco. Este método debe seguir perfeccionándose para poder llegar a ser una alternativa para los laboratorios de PIV de embriones que requieran simplificar la rutina de trabajo tomando todas las medidas de ahorro posible y cubrir los requerimientos y demanda a gran escala.

Abstract

A principal factor determining rates of blastocysts obtained with the technique of in vitro production (IVP) embryo is the quality of oocytes. For that reason is necessary to provide adequate conditions of culture system for oocytes to develop into viable embryos. The purpose of this study was to evaluate the effect of temperature preservation of a commercial medium of in vitro maturation (IVM; TCM-199) on the development capacity of bovine oocytes. The oocytes were recovered from ovaries of slaughtered cows, using the technique of follicular aspiration. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were selected and placed to mature in both, fresh and freeze/ thawin liquid nitrogen (LN2 ) IVM medium Matured oocytes were fertilized in vitro (IVF) and then the presumptive zygotes were cultured for 8 days in modified synthetic oviductal fluid medium supplemented with essential and nonessential amino acids (mSOFaa) + 8 mg/mL bovine serum albumin (BSA). No statistical difference in the rates of IVM-IVF and embryo division between the two treatments was observed. On the contrary, significant differences (P <0.05) were found in the production of blastocysts from oocytes matured in fresh medium vs frozen on day 8 (29.08% vs 13.01% respectively). In conclusion, using frozen medium of IVM an adequate nuclear maturation is obtained of bovine oocytes. It also provides a rate of fertilization and embryo division similar to that provided by the fresh medium. This freezing method should be further improved for to become an alternative for laboratories requiring IVP of embryos simplify routine work taking into consideration all possible savings measures and meet the requirements and demand at a large-scale.

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AHUJA, C., F. MONTIEL, P. PÉREZ Y J. GALLEGOS. 2009. Medio alternativo para la producción in vitro de embriones bovinos. Zootecnia Tropical. 27: 277-284.

ANCCO, E., D. DIPAZ, C. QUISPE, K. ORIUNDO Y E. MELLISHO. 2015. Desarrollo de embriones bovinos in vitro después de la fecundación de ovocitos usando semen de dife- rentes toros. Spermova. 5:129-133.

ASAF, S., G. LEITNER, O. FURMAN, Y. LAVON, D. KALO, D. WOLFENSON Y Z. ROTH. 2014. Effects of Escherichia coli and Staphylococcus aureus induced mastitis in lactating cows on oocyte developmental competence. Reproduction. 147:33-43.

BÁEZ, F., L. HERNÁNDEZ Y P. VILLAMEDIANA. 2008. Estudio estructural del huso meiótico de ovocitos bovinos vitrificados. Revista Científica FCV-LUZ 18:253-261.

BÁEZ, F., Y. MÉNDEZ Y P. VILLAMEDIANA. 2014. Complemento cromosómico de embriones bovinos (Bos Taurus indicus) producidos in vitro. CIENCIA. 22:14 – 20.

CAÍNZOS, J. 2012. Diseño de un medio definido para la maduración in vitro de ovocitos bovinos en baja tensión de oxígeno. Tesis Doctoral. Dpto. de Patología Animal, Facultad De Veterinaria De Lugo, Universidad de Santiago de Compostela, Santiago de Compostela, 193 pp.

CHRISTOPIKOU, D., C. KARAMALEGOS, S. DORIZA, M. ARGYROU, P. SISI, S. DAVIES Y M. MASTROMINAS. 2010. Spindle and chromosome configurations of human oocytes matured in vitro in two different culture media. Reproductive Bio Medicine Online 20:639– 648.

DA COSTA, N., K. LINS BRITO, P. DI PAULA BESSA SANTANA, M. DA SILVA CORDEIRO, T. VELASCO GUIMARÃES SILVA, A. XIMENES SANTOS, P. DO CARMO DE AZEVEDO RAMOS, S. DO SOCORRO DAMASCENO SANTOS, W. ALLAN KING, M. DOS SANTOS MIRANDA Y O. MITIO OHASHI. 2015. Effect of cortisol on bovine oocyte maturation and embryo development in vitro. Theriogenology. 85:323-329.

DOVOLOU, E., E. PERIQUESTA, I. MESSINIS, T. TSILIGIANNI, K. DAFOPOULOS, A. GUTIERREZ Y G. AMIRIDIS. 2014. Daily supplementation with ghrelin improves in vitro bo- vine blastocysts formation rate and alters gene expression related to embryo qual- ity. Theriogenology. 81:565-571.

FOLCHINI, N., F. LEIVAS, F. SANTOS, E. SCHWENGBER, D. MARTIN, C. SPIAZZI Y D. BRUM. 2012. Uso de mini Percoll modificado para seleção e redução da formação de espé- ciesreativas de oxigênio (ROS) em espermatozoides bovinos. Revista Brasileira De Reprodução Animal. 36:239-244.

GONZALEZ, R. 2014. Criogenia cálculo de equipos recipientes a presión. Ediciones Díaz de Santos. pp 5-6.

GUIMARÃES, A., F. LEIVAS, F. SANTOS, E. SCHWENGBER, A. GIOTTO, C. MACHADO, C. GONCALVES, N. FOLCHINI Y D. BRUM. 2014. Reduction of centrifugation force in discontinuous percoll gradients increases in vitro fertilization rates without reducing bovine sperm recovery. Animal Reproduction Science. 146: 103–110.

GUIMARÃES, A., S. PEREIRA, L. LEME Y M. DODE. 2015. Evaluation of the simulated physio- logical oocyte maturation system for improving bovine in vitro embryo production. Theriogenology. 83:52–57.

HERNÁNDEZ, A. Y H. HERNÁNDEZ. 2010. Efecto de la suplementación con L-cisteína en la maduración in vitro de ovocitos bovinos. Revista Científica FCV-LUZ. 20:268 – 273.

HOLM, P., P.J. BOOTH, M.H. SCHMIDT, T. GREVE Y H. CALLENSEN.1999. High bovine blastocyst development in a static in vitro production system using SOFaaci medium sup- plemented with sodium citrate and myo-inositol with or without serum proteins. Theriogenology. 52:683–700.

JO, H., J. BANG, S. KIM, B. CHOI, J. JIN, H. KIM, I. JUNG, T. SUH, N. GHANEM, Z. WANG Y I. KONG. 2014. Production of female bovine embryos with sex-sorted sperm using intracytoplasmic sperm injection: Efficiency and in vitro developmental competence. Theriogenology. 81:675–682.

LEIVAS, F., D. BRUM, S. FIALHO, W. SALIBA, M. ALVIM, M. BERNARDI, M. RUBIN Y C. SILVA. 2011. Fetal calf serum enhances in vitro production of Bos taurus indicus embryos. Theriogenology. 75:429–433.

MADRID, A., J. GÓMEZ-PASTRANA, F. SANTIAGO, J. MADRID Y J. CENZANO. 2003. Refrigeración, congelación y envasado de los alimentos. Ediciones Mundi-Prensa. pp 57.

MEIRELLES, F., A. CAETANO, Y. WATANABE, P. RIPAMONTE, S. CARAMBULA, G. MERIGHE, Y S. GARCÍA. 2004. Genome activation and developmental block in bovine embryos. Animal Reproduction Science. 83:13-20.

MOMOZAWA, K. Y Y. FUKUDA. 2011. Establishment of an advanced chemically defined medium for early embryos derived from in vitro matured and fertilized bovine oocytes. Journal of Reproduction and Development 57:681-689.

OLIVEIRA, D. 2006. Produção in vitro de embriões: cultivo de embriões pós-eclosão e criopreservação de meios prontos para uso. Tese de Doutorado. Instituto de Ciéncias Biológicas, Univ. De Brasília, Brasília, 106 pp.

PALASZ, A. Y J. DE LA FUENTE. 2007. Cultivo de embriones bovinos: efecto de los medios de cultivo y de los requerimientos fisiológicos sobre la calidad de los embriones producidos in vitro. Revista Cría y Salud Bovina. N° 9:36-42.

PALMA, G. 2001. Biotecnología de la reproducción. Argentina. Ediciones INTA. pp 273.

PELÁEZ, J., Y. URRIBARRÍ, A. PIRELA, F. BAEZ, P. VILLAMEDIANA Y H. HERNANDEZ. 2012. Influencia de la predominancia racial sobre la competencia de maduración, fecundación y desarrollo in vitro de ovocitos bovinos. Ciencias del Agro, Ingeniería y Tec- nología 3: 21-42.

RUIZ, S. Y S. ASTIZ. 2010. Producción in vitro de embriones (PIV) en biotecnología de la reproducción bovina. ANEMBE. 88: 25-32.

SALGADO, R., J. SIMANCA Y O. VERGARA. 2013. Efecto del factor de crecimiento epidermal (EGF) sobre la maduración de ovocitos bovinos cultivados in vitro. Revista Científica FCV-LUZ 23:325-328.

SAMARDZIJA, M., M. KARADJOLE, I. GETZ, Z. MAKEK, M. CERGOLJ Y T. DOBRANIC. 2006. Effects of bovine spermatozoa preparation on embryonic development in vitro. Reproductive Biology and Endocrinology. 4:58:1-7.

SIEREN, K. Y C. YOUNGS. 2001. Assessment of BoviPureTM for the in vitro production of bovine embryos. Beef Research Report. Iowa State University, A.S. EE.UU. Leaflet R 1768, 3 pp.

TAREQ, K., Q. AKTER, H. TSUJII, M. YAHIA KHANDOKER Y I. CHOI. 2013. Effect of dipeptides on in vitro maturation, fertilization and subsequent embryonic development of por- cine oocytes. Asian - Australasian Journal of Animal Sciences. 26: 501-508.

VALEANU, S. D. DRUGOCIU Y P. ROSCA. 2015. Effect of Single layer centrifugation using BoviPure on frozen-thawed bovine sperm during a 6 hours survival test. Romanian Biotechnological Letters. 20:10327-10333.

ZULLO, G., G. ALBERO, G. NEGLIA, C. DE CANDITIIS, G. BIFULCO, G. CAMPANILE Y B. GASPARRINI. 2016. L-ergothioneine supplementation during culture improves quality of bovine in vitro–produced embryos. Theriogenology. 85:688–697.

Publicado
2020-10-29
Cómo citar
Rosell Viloria, L. G., Millano Bracho, Z. del C., Báez Contreras, F., Villamediana Monreal, P., & González Fernández, R. (2020). Efecto de la temperatura de conservación del medio de maduración in vitro sobre la capacidad de desarrollo de ovocitos bovinos. / Effect of in vitro maturation medium on development capacity of bovine oocytes. Boletín Del Centro De Investigaciones Biológicas, 51(1), 6-18. Recuperado a partir de https://mail.produccioncientificaluz.org/index.php/boletin/article/view/34279
Sección
Articulos