Inducción de cooperatividad homotrópica positiva en la unión de antagonistas al receptor colinérgico muscarínico de corteza frontal humana
Abstract
Se estudió la unión de [3H]-Benzilato de Quinuclidinilo ([3H]-QNB) y [3H]-Metilescopolamina ([3H]-NMS) al Receptor Colinérgico Muscarínico (RCM) de Corteza Frontal Humana (CFH). Cuando las fracciones de CFH fueron preparadas y ensayadas en medios privados parcial o totalmente de cationes (por uso de EGTA, TRIS o resinas de intercambio iónico) la unión corresponde a una cinética de cooperatividad homotrópica positiva (CHP). El efecto de EGTA para inducir CHP dependió del buffer usado. La magnitud de la CHP depende de la concentración de fosfato y también es inducida por HEPES. Cuando la unión de [3H]-QNB al RCM de CFH fue analizada utilizando fracciones de CFH preparadas y ensayadas en buffer sin extracción catiónica, se caracterizó por mostrar cinética hiperbólica simple. El uso de Borato como sistema buffer para la preparación y ensayo de las fracciones de CFH, induce una cinética homotrópica negativa y/o de heterogeneidad para la unión de [3H] -QNaB los RCMs. La realización de curvas de saturación para [3H]-NMS, en condiciones experimentales que garantizan la cinética CHP para [3H]-QNB mostraron, de acuerdo a análisis de Scatchard, linealidad hasta el 90% de ocupación con un perfil curvilíneo posterior. Curvas de inhibición realizadas usando concentraciones saturantes de [3H]-NMS, mostraron que NMS no desplaza al marcador radioactivo con características de inhibidor reversible competitivo simple, obteniéndose coeficientes de Hill (NH) de 1,35, siendo la Ki de NMS menor que la Kd de [3H]-NMS. Adicionalmente, curvas de inhibición [3H]-NMS/QNB mostraron que la Ki de QNB disminuye en función de la concentración de [3H]-NMS, sugiriendo que también [3H]-NMS presenta el fenómeno de CHP. El desplazamiento de unión de [3H]-NMS al RCM de la CFH por el antagonista Pirenzepina fue compatible con 2 sitios (M1 y M2) siendo predominantes los sitios de alta afinidad (M1), atribuyendosele a esta subpoblación la CHP.
