Obtención y aislamiento de protoplastos de tejido radicular de Allium cepa, L.
Abstract
La ausencia de una pared externa rígida y la exposición completa de la membrana celular convierten a los protoplastos en un sistema ideal para la investigación en procesos de transporte y división celular. En este trabajo se propone un protocolo para la obtención y aislamiento de protoplastos a partir de tejido radicular de Allium cepa, L. Se evaluó la efectividad de dos métodos de desinfección para las raíces como paso previo al proceso. Se probaron las enzimas celulasa y pectinasa a concentraciones que fluctuaron entre 0,01% y 2%. La purificación se efectuó en solución de sacarosa y en solución de Histopaque® 1077. Para la adaptación y recuperación se utilizó el medio osmótico para protoplastos y el medio mínimo esencial de Eagle. Para cada uno de los ensayos, la visualización y cuantificación de los protoplastos se llevó a cabo mediante tinción con orceína aceto-clorhídrica y por microscopía de fluorescencia utilizando el fluorocromo naranja de acridina. Se comprobó que el protocolo propuesto es eficiente para el aislamiento de protoplastos viables a partir de tejido radicular de Allium cepa, L., con un promedio de recuperación de 31,465 protoplastos/g de tejido. Los aportes de esta investigación permitirán el estudio de la expresión de proteínas nucleares reguladoras del ciclo celular en células vegetales, cuyas gruesas paredes constituyen una barrera infranqueable.
